安捷倫液相色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行的。

　　較長的色譜柱組分保留較強(qiáng)，運(yùn)行時(shí)間較長，柱效更高，分離度效果更好。在實(shí)際工作中應(yīng)綜合衡量運(yùn)行時(shí)間和柱效，選擇長度適宜的色譜柱。例如含量測(cè)定、溶出檢測(cè)對(duì)于分離的要求較低，可選用較短的色譜柱，減少運(yùn)行時(shí)間；有關(guān)物質(zhì)一般選擇較長的色譜柱，提高分離效果。

　　使用安捷倫液相色譜柱的常見問題有哪些？

　　1、對(duì)于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)？為什么要這樣做？

　　答：新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過程，除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡，特別是測(cè)定分子量比較高的多肽，尤其重要。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢，平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長。具體平衡方式也很簡(jiǎn)單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測(cè)定。

　　如果要加快平衡時(shí)間，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測(cè)物對(duì)新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

　　2、測(cè)定多肽，一般采用什么柱子？流動(dòng)相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇柱子？

　　答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測(cè)定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

　　3、安捷倫液相色譜柱在什么情況下可以清洗一下篩板呢？原來也討論過這個(gè)問題，我也拆下來清洗過，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的篩板安裝上去。問題解決了，但使用壽命會(huì)不會(huì)減少呢？

　　答：柱頭污染了，就取出污染的，再裝一些填料。因?yàn)榧尤肽愎瘟诵┨盍?，那么微觀的塔板數(shù)就少了。假入你刮得不多，僅表面，可能就是一些臟物，所以，問題解決。但是今后還會(huì)有同樣問題，再掛，那么不小心刮，影響柱效。建議還是裝一個(gè)預(yù)柱。